ABSTRACT
@#[摘 要] 目的：探索RAD18影响结直肠癌细胞增殖及调节NK细胞对结直肠细胞的杀伤作用及其可能的机制。方法：采用生物信息学技术分析结直肠癌组织中RAD18和miR-145-5p的表达及两者之间的调控关系、分析RAD18富集通路。采用qPCR法验证RAD18和miR-145-5p在结直肠癌细胞中的表达，双荧光素酶报告基因实验验证miR-145-5p与RAD18的调控关系。按转染物的不同将SW480、HCT-15细胞分为将si-RAD18组、si-NC组，另向SW480细胞分别转染inhibitor-NC+si-NC、miR-145-5p inhibitor+si-NC或miR-145-5p inhibitor+si-RAD18，采用CCK-8法、克隆形成实验分别检测敲降miR-145-5p和/或RAD18对细胞增殖、克隆形成的影响；将各组细胞分别与经IL-2激活的NK92细胞共培养，采用乳酸脱氢酶释放法、ELISA和免疫荧光染色法分别检测NK细胞的细胞毒性、细胞因子分泌及细胞表面穿孔素和颗粒酶B表达的影响。结果：RAD18在结直肠癌组织和细胞中呈高表达（均P<0.01）。敲降RAD18可以抑制结直肠癌细胞增殖能力（P<0.05）和促进NK细胞活力、细胞毒性、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF分泌及穿孔素和颗粒酶B的表达（均P<0.05）。双荧光素酶报告实验验证了RAD18-3’UTR与miR-145-5p的结合关系，miR-145-5p在结直肠癌组织和细胞中低表达（P<0.05或P<0.01）。miR-145-5p可以靶向下调RAD18的表达（P<0.05），过表达RAD18可以逆转miR-145-5p过表达对NK细胞杀伤效应的促进作用（均P<0.05）。结论：miR-145-5p可靶向下调RAD18的表达，miR-145-5p/RAD18轴能够影响结直肠癌细胞的增殖和NK细胞对其的细胞毒作用。